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云南气泡水饮料研发的配方研发机构
工艺操作要点
菌种分离筛选流程：采样→增殖培养→平板分离→初筛-复筛-发酵实验（终筛）→菌种保藏
采样采样就是从自然界中采集含有目的菌的样品。
研究菌种从蜂蜜原料中采集、筛选。考虑到今后工业化生产主要原料为油菜花蜂蜜因此本研究从油菜花蜂蜜中直接采样。
增殖培养无菌条件下取5mL油菜花蜂蜜接种到已配制好的蜂蜜培养基中，置于恒温振荡培养箱中15℃
150rmin培养30d培养过程定期观察并记录。
平板分离将经增殖培养的样品进行适当稀释，涂布麦汁琼脂平板，置于恒温培养箱中25℃培养，定期观察并记录。
初筛挑取80株经过二次平板分离的酵母菌株采用艾氏管法测定其发酵能力每株菌接种1管，保留发酵能力较高的菌株20株。
复筛将选取的20株酵母菌再次接种艾氏管每株3管，测试其发酵能力，保留4株发酵能力较高的菌株。
发酵试验：将复筛得到的4株酵母菌株接种于蜂蜜培养基28℃恒温培养30d在发酵后期不断对各个样品进行感官品评同时进行部分理化指标的检测并不断观察记录。从中筛选出性能良好、适宜大生产的菌株1-2株。菌种的保藏将筛选得到的菌株接种于麦汁斜面置28℃恒温箱中培养24h置4C冰箱中保存。
菌种的鉴定：选取筛选得到的2株发酵能力较强的酵母菌参照《酵母菌的特征与鉴定手册》进行菌种鉴定1具体方法：
（1）细胞形态接种麦芽汁液体培养基28℃、150r/min培养24h制备水浸片显微镜检观察菌体形态。并通过电子显微镜观察其菌体形态测定其细胞大小。
（2）菌落形态观察将待测菌株在麦芽汁琼脂培养基上平板划线28℃培养观察菌群形态特征。
（3）糖类发酵测定将欲鉴定的菌株分别接种于酵母碳源发酵管中25℃-28℃培养每天观察结果。一般观察2d-3d即可凡不发酵者或弱发酵者，可延长至观察5d
（4）碳源同化试验菌液制备将待测菌株制成菌悬液
（1mL无菌生理盐水接入约1接种环的新培养的酵母菌制成的菌悬液）
平板制备将此菌悬液全部倒入经熔化并冷却至45℃左右的同化碳源基础培养基中使菌体在培养基中混和均匀静置凝固后在28℃把培养皿倒置几小时，使表面不致太湿。点样在培养皿底部做上碳源名称的标记分别用无菌不锈钢匙或无菌药匙按标记加糖少许（约米粒大）如结果不明显可于第2d再补加一次糖。
观察观察结果时以葡萄糖作对照，一般是25℃-28℃培养1d-2d观察结果凡能同化者在所加碳源的周围形成生长圈。凡生长缓慢的酵母或是在测半乳糖同化时，可适当采用液体培养法，即在含某种碳源的液体培养基中接入酵母25℃-28℃培养1-2周以含葡萄糖的液体培养基作对照观察酵母生长情况是否更加浑浊或形成环、岛等必要时可延长至观察3周。
（5）氨源同化试验培养基的制备是将酵母菌无氮合成培养基熔化取无菌试管4支加入已熔的培养基5mL然后向其中的2只加入硝酸钾灭菌制成斜面。
接种、培养将4支斜面培养基中都接入供试菌（2支没有氮源的斜面试管作对照）置于28℃恒温培养观察。能观察到菌体生长现象表明菌株可以同化该氮源。
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